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Invitrogen核/膜系統(tǒng) 一、 實(shí)驗(yàn)原理： 酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過(guò)重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來(lái)鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄.另外實(shí)驗(yàn)詳情和步驟都做了闡述。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來(lái)完成的，采購(gòu)烏魯木齊酵母雙雜交文庫(kù)實(shí)驗(yàn)外包,西北醫(yī)藥、保養(yǎng)，西安淳風(fēng)生物科技有限公司,西安淳風(fēng)生物科技有限公司,并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。 酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中建立 。典型的真核生物轉(zhuǎn)錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域: DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(transcription-activating domain)。前者可識(shí)別DNA上的特異序列， 并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游， 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用，烏魯木齊酵母雙雜交文庫(kù)實(shí)驗(yàn)外包,西安醫(yī)藥、保養(yǎng)實(shí)驗(yàn)外包，做烏魯木齊酵母雙雜交文庫(kù)實(shí)驗(yàn)外包,西安醫(yī)藥、保養(yǎng)， 啟動(dòng)它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。 二、實(shí)驗(yàn)步驟： 1.1 RNA提取 1.2 mRNA分離 1.3 cDNA初級(jí)文庫(kù)的構(gòu)建 1.3.1 cDNA一鏈的合成 1.3.2 cDNA第二鏈的合成 1.3.3 cDNA adapter的制備 1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份) 1.3.5 cDNA分級(jí)分離 1.3.6 BP重組 1.3.7 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B 1.3.8 文庫(kù)克隆檢測(cè) 1.3.9 文庫(kù)庫(kù)容量、重組率、插入片段長(zhǎng)度鑒定 1.4 cDNA次級(jí)文庫(kù)的構(gòu)建 1.4.1 初級(jí)文庫(kù)的質(zhì)粒抽提 1.4.2 LR重組 1.4.3 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B 1.4.4 文庫(kù)克隆檢測(cè) 1.4.5 文庫(kù)庫(kù)容量、重組率、插入片段長(zhǎng)度鑒定

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